مرجع دانلود پاورپوینت های درسی

حجم فایل : 286.9 KB
نوع فایل : پاور پوینت
تعداد اسلاید ها : 42
بنام خدا كلن كردن ژن
مراحل كلن كردن ژن استخراج ژن مورد نظر
انتقال ژن مورد نظر به ناقل مناسب
انتقال ناقل نوتركيب به درون سلول ميزبان
گزينش سلول هاي تراريخت شده
تكثير سلول هاي تراريخت شده اهداف كلونينگ توليد انبوه يك پروتئين
مثال:انسولين انساني هرمون رشد انساني اينترفرون واكسن هپاتيت B اينترلوكين اريتروپوئيتين
2. دستكاري مسير هاي بيولوژيك جهت اصلاح محصولات گياهي وحيواني
مثال:توليد گوجه فرنگي كه ديتر نرم ورسيده ميشود ابزار مورد نياز براي كلونينگ انزيم هاي برشي وانزيم هاي اتصال دهنده

ناقلين كلونينگ انزيم هاي برشي اين انزيمها اندونوكلئاز ميباشند واز باكتري استخراج ميشوند اين انزيم ها در باكتري نقش دفاعي دارند نحوه نام گذاري اين انزيم ها حرف اول: جنس
حرف دوم وسوم: گونه
حرف چهارم : نژاد
عدد: ترتيب كشف انزيم از منبع
مثال :ECOR1
مثال :HIND3
مثال :BamH1 خصوصيات انزيم هاي برشي كوفاكتور:Mg 2+
توالي هاي پاليندرومي را شناسايي وبرش ميدهند
نحوه برش به دو صورت است:1)ايجاد انتهاي چسبان 2)ايجاد انتهاي صاف انزيم هاي اتصال دهنده اين انزيم ها براي اتصال ژن خارجي به ناقل استفاده ميشوند
دو نوع انزيم انتصالي داريم:
Ecoli.DNA ligase
T4 DNA ligase ناقلين كلونينگ ناقلين كلونيگ بايد داراي ويزگي هاي زير باشند:
Ori داشته باشند
داراي ژن نشانگر باشند
داراي مكان برشي باشند انواع ناقلين كلونينگ پلاسميد ها: PBR322 Puc pTi
باكتريوفاژ: M13 لامبدا
كاسميد
شاتل
كروموزو مصنوعي مخمر انواع پلاسميد بر حسب عملكرد: R پلاسميد
F پلاسميد
COL پلاسميد
پلاسميد Vir
پلاسميد deg انواع پلاسميدهاي كلونينگ Pbr322
اندازه:4.36kb
رپليكان: colE1
ژن نشانگر: amp R / tet R
تعداد نسخه ها: 15 الي 20 نسخه توضيح نحوه گزينش سلول هاي تراريخت شده ژن مورد نظر را وارد TeT R ميكنيم سپس به درون باكتري انتقال ميدهيم
3نوع سلول خواهيم داشت:
سلول هايي كه پلاسميد وارد انها نشده
سلول هايي كه حاوي پلاسميد غير نوتركيب ميباشند
سلول هايي كه حاوي پلاسميد نوتركيب ميباشند سلول هاي دسته اول به امپي سيلين حساس ميباشند و دسته دوم وسوم مقاوم به امپي سيلين مي باشند بنابر اين با اضافه كردن امپي سيلين سلول هاي دسته اول را حذف ميكنيم سپس 2 محيط كشت تهيه ميكنيم كه يكي محتوي امپي سيلين وديگري محتوي تترا سايكلين
در محيط كشت امپي سيلين هر2 گروه سلول رشد ميكنند و در محيط كشت تترا سايكلين سلول هاي حاوي پلاسميد غير نوتركيب رشد ميكند
بامقايسه باكتريها در اين دو محيط كشت باكتري هاي تراريخت راشناسايي ميكنيم PUC پلاسميد كاليفرنيايي اندازه:2.7KB
رپليكان: COL E1
ژن نشانگر:amp R / Lacz
تعداد نسخه ها:500-700 توضيح...