مرجع دانلود پاورپوینت های درسی

حجم فایل : 1.5 MB
نوع فایل : پاور پوینت
تعداد اسلاید ها : 58
بنام خدا واکنش زنجیره ای پلی مراز
بسم الله الرحمن الرحیم واکنش زنجیره ای پلی مراز :

مخترع واکنش PCR کَری مولیس (Kary Mullis) می باشد که در سال 1983 این روش را جهت تکثیر DNA معرفی کرد.

قبل از این کشف، ساخت قطعات DNA با روش های کند و پر هزینه شیمیایی انجام می گرفت.

به دلیل اهمیت این اختراع، کاربردهای فراوان و نقش ارزنده آن در پیشرفت علم ژنتیک و زیست شناسی مولکولی، وی جایزه نوبل شیمی را در سال 1993 دریافت کرد.
واکنش PCR به طور روزمره در اکثر آزمایشگاه های تشخیصی و تحقیقاتی استفاده می شود و در موارد بسیاری مثل :
شناسایی و جداسازی ژن ها
کلونینگ
طبقه بندی و شناسایی موجودات زنده
تشخیص بیماری های ژنتیکی
و حتی پرونده های جنایی و تعیین هویت کاربرد دارد. استخراج ماده ژنتیکی اولین قدم در مهندسی ژنتیک جداسازی با خالص سازی DNA و RNA می باشد. که این کار دارای مراحلی است که عبارتند از :
1) شکستن سلول
سلول های حیوانی(شوک اسمزی- سدیم دودسیل سولفات)
سلول های گیاهی (پکتیناز و سلولاز)
باکتری ها با توجه با گرم مثبت یا گرم منفی
2) رسوب دادن DNA و RNA :
الکل سبب تجمع و رسوب ماده ژنتیکی می شود.
3) جدا کردن DNA وRNA :
4) رسوب پروتئین ها : (استفاده از فنل و یا محلول های غلیظ نمک های مختلف)
5) جداسازی DNA و RNA از یکدیگر: (استفاده از DNase و RNase)
6)رسوب ماده ژنتیکی با اتر
7) اسپکتروفتومتری:(جهت تایید استخراج) PCR یا واکنش زنجیره ای پلیمراز (Polymerase Chain Reaction) تکنیکی است که با استفاده از آن می توان در مدت زمان کوتاهی قطعه خاصی از مولکول DNA را در شرایط آزمایشگاهی میلیون ها بار تکثیر نمود.
این قطعه DNA ممکن است:
یک ژن
بخشی از یک کروموزوم
یا بخش هایی از ژنوم یک موجود باشد. اساس این روش بسیار ساده بوده و مانند واکنش همانندسازی DNA در موجودات زنده توسط آنزیم DNA پلیمراز صورت می گیرد.

در موجودات زنده، مجموعه ای از چند پروتئین و آنزیم در فرآیند همانند سازی DNA نقش دارند در حالی که در واکنش PCR تنها نوع خاصی آنزیم DNA پلیمراز مقاوم به حرارت به نام Taq polymerase به همراه بافر، کلرید منیزیم و نوکلئوتیدها جهت تکثیر قطعات DNA استفاده می شود.
ساز و کار (برنامه) واکنش PCR اساس واکنش PCR جهت تکثیر توالی DNA دو رشته ای، تغییرات دمایی می باشد. در ابتدا پیوندهای هیدروژنی دو رشته توالی DNA با حرارت (94-95 درجه سلسیوس) شکسته و دو رشته از یکدیگر جدا می شوند.

سپس دمای واکنش پایین آورده می شود (معمولاً 50 تا 60 درجه سلسیوس). در این مرحله، دو قطعه کوتاه DNA تک رشته ای (معمولاً بین 18 تا 30 نوکلئوتید) که دقیقاً مشابه دو طرف قطعه DNA مورد نظر برای تکثیر طراحی و ساخته شده اند (با نام پرایمر یا ...